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线粒体容积变化是衡量线粒体活性的基本参数。线粒体应对细胞对于药物、凋亡诱导、细胞周期变化等反应采取的活性变化，包括膜电位、氧消耗、以及膜通道孔（mitochondrial permeability transition pore；MPTP）功能等的改变。线粒体基质容量（mitochondrial matrix volume）成为检测线粒体活性和功能的指标。一旦各种因素包括凋亡刺激、活性氧影响导致线粒体膜通道孔开放或膜电位的消失，而导致线粒体容积增大，即线粒体膨胀（mitochondrial swelling），使线粒体的光散射性（light scattering）降低，通过分光光度仪520nm波长的吸光峰值的变化，定量分析线粒体的膨胀程度。该波长区域可以避免细胞色素和蛋白质的干扰。  
 
产品内容
 
HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO膨胀液（Reagent B） 微升
产品说明书 1份
 
保存方式
 
保存在4℃冰箱里，有效保证6月
 
用户自备
 
比色皿96孔板：用于线粒体光度分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于线粒体光度定量分析
 
实验步骤
 
实验开始前，开启并设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长520nm，间隔30秒测读1次，持续10分钟至30分钟，并置零
 
一、 样品膨胀度检测
 
1． 准备好待测的纯化线粒体样品：对照样品和处理样品
2． 分别移取20微升线粒体样品（总量为200微克）到比色皿或96孔板的对应孔里
3． 分别加入xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
4． 即刻放进分光光度仪或酶标仪（波长520nm）：获得0分钟初始读数 
5． 动态测读1分钟或室温下静置1分钟
6． 即刻分别加入xx微升HEPENGBIO膨胀液（Reagent B） 
7． 即刻放进分光光度仪或酶标仪（波长520nm）：动态记录10分钟吸光值变化或设定时间点记录实际吸光值
8． 获得实际吸光读数：0分钟读数-10分钟吸光读数――实际吸光读数高，表明线粒体膨胀度高
9． 或构建线粒体膨胀-药物浓度关系曲线：纵座标（Y）为实际吸光读数，横座标（X）为药物浓度
 
二、诱导剂筛选检测
 
1． 准备好待测的纯化线粒体样品
2． 移取20微升线粒体样品（总量为200微克）到比色皿或96孔板的对应孔里
3． 加入xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
4． 即刻放进分光光度仪或酶标仪（波长520nm）：获得0分钟初始读数 
5． 动态测读1分钟或室温下静置1分钟
6． 即刻加入10微升用户自备的待测诱导剂，混匀（注意：可以设定不同浓度梯度）
7． 即刻放进分光光度仪或酶标仪（波长520nm）：动态记录10分钟吸光值变化或设定时间点记录实际吸光值――吸光值降低，表明诱导剂作用增强
8． 构建线粒体膨胀诱导曲线：纵座标（Y）为实际吸光值 ，横座标（X）为时间（分钟）
9． 或构建线粒体膨胀-诱导剂浓度关系曲线：纵座标（Y）为实际吸光值，横座标（X）为诱导剂浓度
 
三、抑制剂筛选检测
 
1． 准备好待测的纯化线粒体样品
2． 移取20微升线粒体样品（总量为200微克）到比色皿或96孔酶标板的对应孔里
3． 加入xx微升室温预热的HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
4． 即刻放进分光光度仪或酶标仪（波长520nm）：获得0分钟初始读数 
5． 动态测读1分钟或室温下静置1分钟
6． 加入10微升用户自备的待测抑制剂，混匀（注意：可以设定不同浓度梯度）
7． 动态测读2分钟或室温下静置2分钟
8． 即刻加入xx微升HEPENGBIO膨胀液（Reagent B），混匀
9． 即刻放进分光光度仪或酶标仪（波长520nm）：动态记录10分钟吸光值变化或设定时间点记录实际吸光值――吸光值不变，表明抑制剂作用增强
10． 或构建线粒体膨胀-抑制剂浓度关系曲线：纵座标（Y）为实际吸光值，横座标（X）为抑制剂浓度