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肌动蛋白（actin）是42KD的球蛋白，构成细胞骨架的微丝（microfilament）和肌肉收缩装置的细肌丝（thin filament），以及细胞膜表面伪足（pseudopodia）和微绒毛（microvilli）。肌动蛋白存在于所有真核生物细胞中，且高度进化保留，参与各种重要细胞功能，包括细胞迁移、细胞分裂、肌肉收缩、细胞形态维护、膜转运（membrane trafficking） 等。哺乳动物具有六种异构体，分成α、β、γ三类。球状肌动蛋白（G-actin）在生理条件下，组合成长丝聚合体，转化为丝状肌动蛋白（F-actin），形成细胞骨架的微丝。肌动蛋白的聚合与解聚的动态学变化是细胞骨架装配（cytoskeleton assembly）的主要参数之一。鬼笔环肽（phalloidin）是一种由毒性菇类中分离的二环七肽（bicyclic heptapeptide）生物碱，与聚合的微丝（F-肌动蛋白）结合，因此通过异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鬼笔环肽可以体外探测细胞F-肌动蛋白的分布和含量，据此分析细胞骨架装配的调控机制。
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固着液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO通透液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO封阻液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent E） 微升
HEPENGBIO复染液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent E）和HEPENGBIO复染液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
荧光（共聚焦）显微镜：用于细胞荧光观察
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下冻融。移取xx微升HEPENGBIO通透液（Reagent C）到1.5毫升离心管，然后分别加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent E）和HEPENGBIO复染液（Reagent F），混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，置于冰槽里，放进暗室里备用。然后进行下列操作。
一、 直接法
1． 准备1个细胞培养6孔板，内置1个细胞1 X 1 cm大小的载玻片
2． 接种待测细胞培养，直至每孔铺满率达70％
3． 小心抽去细胞培养液
4． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
5． 小心抽去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
6． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO固着液（Reagent B）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
7． 置于冰槽里孵育30分钟
8． 小心抽去HEPENGBIO固着液（Reagent B）
9． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO通透液（Reagent C）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
10． 小心抽去HEPENGBIO通透液（Reagent C）
11． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO封阻液（Reagent D）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
12． 室温下孵育30分钟
13． 小心抽去HEPENGBIO封阻液（Reagent D）
14． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
15． 小心抽去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
16． 重复实验步骤14和15一次
17． 小心加上xx微升HEPENGBIO染色工作液， 覆盖样品表面
18． 在暗室里室温下孵育60分钟
19． 小心抽去HEPENGBIO染色工作液
20． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
21． 小心抽去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
22． 封片
23． 即刻在荧光（共聚焦）显微镜下进行观察（每个视野计数200个细胞）：激发波长488nm，散发波长530nm（F－肌动蛋白染色）或激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核染色）――
绿色荧光显示F-肌动蛋白；蓝色荧光显示细胞核为圆环或椭圆状
二、 间接法
1． 准备1个25cm2细胞培养瓶的待测细胞，直至铺满率达70％（约100万细胞数）
2． 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）
3． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），覆盖细胞表面
4． 小心移出xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管
5． 加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满细胞表面
6． 放进37℃培养箱孵育1分种
7． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落
8． 加入3毫升用户自备的完全细胞培养液
9． 移入到15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞可以由此步开始）
10． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
11． 小心抽去上清液
12． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
13． 转入到1.5毫升离心管
14． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
15． 小心抽去上清液
16． 加入xx微升HEPENGBIO固着液（Reagent B），混匀
17． 置于冰槽里孵育30分钟
18． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
19． 小心抽去上清液
20． 加入xx微升HEPENGBIO通透液（Reagent C），混匀
21． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
22． 小心抽去上清液
23． 加入xx微升HEPENGBIO封阻液（Reagent D），混匀
24． 室温下孵育30分钟
25． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
26． 小心抽去上清液
27． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
28． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
29． 小心抽去上清液
30． 加入xx微升HEPENGBIO染色工作液
31． 用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
32． 在暗室里室温下孵育60分钟
33． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
34． 小心抽去上清液
35． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
36． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
37． 小心抽去上清液
38． 加入200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
39． 即刻移取10微升在载玻片上压片
40． 在荧光（共聚焦）显微镜下进行观察（每个视野计数200个细胞）：激发波长488nm，散发波长530nm（F-肌动蛋白染色）或激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核染色）――
绿色荧光显示F-肌动蛋白；蓝色荧光显示细胞核为圆环或椭圆状射
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固着液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO通透液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO封阻液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent E） 微升
HEPENGBIO复染液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent E）和HEPENGBIO复染液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
荧光（共聚焦）显微镜：用于细胞荧光观察
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下冻融。移取xx微升HEPENGBIO通透液（Reagent C）到1.5毫升离心管，然后分别加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent E）和HEPENGBIO复染液（Reagent F），混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，置于冰槽里，放进暗室里备用。然后进行下列操作。
一、 直接法
1． 准备1个细胞培养6孔板，内置1个细胞1 X 1 cm大小的载玻片
2． 接种待测细胞培养，直至每孔铺满率达70％
3． 小心抽去细胞培养液
4． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
5． 小心抽去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
6． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO固着液（Reagent B）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
7． 置于冰槽里孵育30分钟
8． 小心抽去HEPENGBIO固着液（Reagent B）
9． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO通透液（Reagent C）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
10． 小心抽去HEPENGBIO通透液（Reagent C）
11． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO封阻液（Reagent D）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
12． 室温下孵育30分钟
13． 小心抽去HEPENGBIO封阻液（Reagent D）
14． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
15． 小心抽去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
16． 重复实验步骤14和15一次
17． 小心加上xx微升HEPENGBIO染色工作液， 覆盖样品表面
18． 在暗室里室温下孵育60分钟
19． 小心抽去HEPENGBIO染色工作液
20． 轻轻加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到细胞载玻片上，覆盖样品表面
21． 小心抽去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
22． 封片
23． 即刻在荧光（共聚焦）显微镜下进行观察（每个视野计数200个细胞）：激发波长488nm，散发波长530nm（F－肌动蛋白染色）或激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核染色）――
绿色荧光显示F-肌动蛋白；蓝色荧光显示细胞核为圆环或椭圆状
二、 间接法
1． 准备1个25cm2细胞培养瓶的待测细胞，直至铺满率达70％（约100万细胞数）
2． 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）
3． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），覆盖细胞表面
4． 小心移出xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管
5． 加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满细胞表面
6． 放进37℃培养箱孵育1分种
7． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落
8． 加入3毫升用户自备的完全细胞培养液
9． 移入到15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞可以由此步开始）
10． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
11． 小心抽去上清液
12． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
13． 转入到1.5毫升离心管
14． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
15． 小心抽去上清液
16． 加入xx微升HEPENGBIO固着液（Reagent B），混匀
17． 置于冰槽里孵育30分钟
18． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
19． 小心抽去上清液
20． 加入xx微升HEPENGBIO通透液（Reagent C），混匀
21． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
22． 小心抽去上清液
23． 加入xx微升HEPENGBIO封阻液（Reagent D），混匀
24． 室温下孵育30分钟
25． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
26． 小心抽去上清液
27． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
28． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
29． 小心抽去上清液
30． 加入xx微升HEPENGBIO染色工作液
31． 用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
32． 在暗室里室温下孵育60分钟
33． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
34． 小心抽去上清液
35． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
36． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5415）
37． 小心抽去上清液
38． 加入200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
39． 即刻移取10微升在载玻片上压片
40． 在荧光（共聚焦）显微镜下进行观察（每个视野计数200个细胞）：激发波长488nm，散发波长530nm（F-肌动蛋白染色）或激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核染色）――
绿色荧光显示F-肌动蛋白；蓝色荧光显示细胞核为圆环或椭圆状射
