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果糖1,6-二磷酸酶（fructose 1, 6-diphosphatase；FBPase；EC3.1.3.11），全称为果糖1,6-二磷酸1-磷酸水解酶（D-fructose-1,6-bisphosphate 1-phosphatehydrolase），为合成代谢（糖异生和Calvin循环）通路中的限速酶质之一，催化果糖1,6-二磷酸转化为果糖6-磷酸的去磷酸化反应，金属离子镁和锰必需。其分为5类，其中IV和V类在古生菌（archaea）和细菌中存在。哺乳动物果糖1,6-二磷酸酶分成2个亚型：I型（肝型）和II型（肌肉型）。在动物肝脏和肾脏组织中高度表达，参与糖异生调节；植物分成2个亚型：胞浆型和叶绿体型。叶绿体型为光依赖性活化，参与光合成碳还原循环，对于AMP抑制不敏感，而胞浆型参与糖异生调节。果糖1,6-二磷酸酶成为潜在的药物靶标，抑制内源性葡萄糖产生。基于底物果糖1,6-二磷酸（D-fructose- 1,6-bisphosphate），在果糖1,6-二磷酸酶的催化下，分解并产生果糖-6磷酸（D-frucose-6-Phosphate）产物后，通过磷酸葡萄糖异构酶（Phosphoglucose isomerase；PGI）和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase；G-6-PDH）反应系统，测定氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADP）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADPH）所产生的吸光峰值的变化（340nm 波长），来定量分析糖原磷酸化酶的总活性。其连续循环反应系统为：
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO底色液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO阴性液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）、HEPENGBIO底色液（Reagent D）和HEPENGBIO反应液（Reagent E）在－20℃冰箱里； 其余的保存在4℃冰箱里，HEPENGBIO底色液（Reagent D）和HEPENGBIO反应液（Reagent E）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
（微型）台式离心机：用于样品制备
比色皿或96孔板：用于光度分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于光度分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
一、 样品准备
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入适量的（xx毫克组织需要xx毫升）HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入到一个液氮冻存管
5． 即刻放进液氮罐过夜
6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7． 放进一个15毫升锥形离心管
8． 加入置于冰槽里的xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
9． 转移到1.5毫升离心管
10． 强力涡旋震荡30秒，充分混匀
11． 放进冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）
12． 即刻放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g （或13000RPM。例如EPPENDORF 5415）
13． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
14． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HEPENGBIO30030.1）
15． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
二、 测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长340nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；HEPENGBIO底色液（Reagent D）避免光照
3． HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO底色液（Reagent D）
4． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent E）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在30℃温度下孵育3分钟
7． 加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）
8． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
9． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（5分钟读数－0分钟读数）
四、 样品测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO底色液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent E）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 在30℃温度下孵育3分钟
6． 加入20微升待测样品（100微克蛋白）（注意：样品须清澈，且pH为6.8）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（5分钟读数－0分钟读数）
五、 计算样品活性
六、 酶标仪测定
1． 在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到所有孔里
3． 分别加入xx微升HEPENGBIO底色液（Reagent D）到所有孔里
4． 分别加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent E）到所有孔里
5． 轻轻摇动96孔板
6． 在30℃温度下孵育3分钟
7． 分别加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）或待测样品（100微克蛋白）（注意：样品须清澈，且pH为6.8）到相应孔里
8． 轻轻摇动96孔板
9． 即刻放进酶标仪检测，包括0分钟读数和5分钟读数）
10． 活性计算
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO底色液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO阴性液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）、HEPENGBIO底色液（Reagent D）和HEPENGBIO反应液（Reagent E）在－20℃冰箱里； 其余的保存在4℃冰箱里，HEPENGBIO底色液（Reagent D）和HEPENGBIO反应液（Reagent E）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
（微型）台式离心机：用于样品制备
比色皿或96孔板：用于光度分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于光度分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
一、 样品准备
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入适量的（xx毫克组织需要xx毫升）HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入到一个液氮冻存管
5． 即刻放进液氮罐过夜
6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7． 放进一个15毫升锥形离心管
8． 加入置于冰槽里的xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
9． 转移到1.5毫升离心管
10． 强力涡旋震荡30秒，充分混匀
11． 放进冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）
12． 即刻放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g （或13000RPM。例如EPPENDORF 5415）
13． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
14． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HEPENGBIO30030.1）
15． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
二、 测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长340nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；HEPENGBIO底色液（Reagent D）避免光照
3． HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO底色液（Reagent D）
4． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent E）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在30℃温度下孵育3分钟
7． 加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）
8． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
9． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（5分钟读数－0分钟读数）
四、 样品测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO底色液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent E）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 在30℃温度下孵育3分钟
6． 加入20微升待测样品（100微克蛋白）（注意：样品须清澈，且pH为6.8）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（5分钟读数－0分钟读数）
五、 计算样品活性
六、 酶标仪测定
1． 在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到所有孔里
3． 分别加入xx微升HEPENGBIO底色液（Reagent D）到所有孔里
4． 分别加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent E）到所有孔里
5． 轻轻摇动96孔板
6． 在30℃温度下孵育3分钟
7． 分别加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）或待测样品（100微克蛋白）（注意：样品须清澈，且pH为6.8）到相应孔里
8． 轻轻摇动96孔板
9． 即刻放进酶标仪检测，包括0分钟读数和5分钟读数）
10． 活性计算
