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赫澎(上海)生物科技有限公司
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病毒介导生化淋巴细胞系制备试剂盒
产品编号 HPBIO-JM492
中文名称: 病毒介导生化淋巴细胞系制备试剂盒
英文名称:
品牌: HEPENGBIO
规格型号: 10次
爱泼斯坦巴尔病毒(Epstein-Barr virus;EBV),又称为人类疱疹病毒4(human herpesvirus 4),是Anthony Epstein和Yvonne Barr于1964年首次成功地将丹尼斯伯基特(Danis Burkitt)发现的非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株,并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒而命名的。其中,人体Hawley EB病毒株作为转化型病毒,广泛用于体外转化静息B淋巴细胞,在细胞毒性T细胞抑制剂的帮助下,通过CD21(CR2)受体进入B细胞,产生永生化类淋巴母细胞系(immortalized lymphoblastoid cell line),不断繁殖,从而提供免疫、分子和功能研究的生物源材料,以及基因组DNA的原始材料,同时长期保存各种疾病相关性细胞库;用于研究EB病毒本身的潜伏性和肿瘤生成机制;用于制备单克隆抗体和MHC蛋白抗原等。 
 
产品内容
 
HEPENGBIO培养液(Reagent A)   500毫升
HEPENGBIO抑制液(Reagent B)   200微升
HEPENGBIO转化液(Reagent C)   10 X 500微升
产品说明书 1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO培养液(Reagent A)在4℃冰箱里,HEPENGBIO抑制液(Reagent B)在-20℃冰箱里,HEPENGBIO转化液(Reagent C)在-70℃冰箱里,避免反复冻融,注意生物安全;有效保证3月
 
用户自备
 
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
25和75cm2细胞培养瓶:用于细胞培养的容器
二氧化碳细胞培养箱:用于细胞培养
4℃台式离心机:用于样品操作
光学显微镜:用于观察细胞形态
 
实验步骤
 
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂置于冰槽里冻融,同时将HEPENGBIO培养液(Reagent A置于37℃恒温水槽预热。然后进行下列操作。
 
1. 准备好新鲜分离(2小时内)的5毫升淋巴细胞悬液(2 X 106细胞/毫升)
2. 转移到15毫升锥形离心管
3. 放进台式离心机离心10分钟,速度为600g
4. 小心抽去上清液
5. 加入5毫升预热的HEPENGBIO培养液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
6. 转移到25cm2细胞培养瓶里
7. 加入20微升HEPENGBIO抑制液(Reagent B),充分混匀
8. 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育60分钟
9. 置于37℃恒温水槽快速冻融1管HEPENGBIO转化液(Reagent C)
10. 加入500微升HEPENGBIO转化液(Reagent C)到细胞培养瓶里,充分混匀
11. 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育1至2周(注意:可见培养液变成桔黄色,细胞成小团聚集;务必不要等到溶液颜色为纯黄色)
12. 加入5毫升新鲜的HEPENGBIO培养液(Reagent A),混匀
13. 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育3天
14. 小心移去5毫升陈旧培养液
15. 加入5毫升新鲜的HEPENGBIO培养液(Reagent A),混匀
16. 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育3天(注意:溶液颜色为桔红色,换液为佳,务必不要等到溶液颜色为纯黄色)
17. 每隔3天重复实验步骤14至16一次,持续3周(注意:可见细胞成较大团聚集,且细胞总量达5 X 106
18. 转移到50毫升75cm2培养瓶里继续培养或分装成1 X 106 细胞/毫升/管冻存
19. (选择步骤)传代培养:1 X 105/毫升
20. 光学显微镜观察:5周后成团细胞形态(10 X)
检测报告(COA)
使用说明
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