体外生育（in vitro production；IVP）包括三大步骤：卵母细胞体外成熟（in vitro maturation）、体外受精（in vitro fertilization；IVF）和体外培养（in vitro culture；IVC）。运用体外系统产生胚胎，可以解决不育的问题。而动物胚胎的产生，可以提供胚胎干细胞、器官移植等。其中兔是许多生物医学研究的重要模式动物。确保胚胎的发育和质量，卵母细胞的体外成熟是最基础的步骤。发育能力的降低主要在于卵母细胞的不完全成熟和多精子穿透性（polyspermic penetration）过高。因此使用化学性精制培养液，可以避免使用成分不明确和不稳定的血清和卵泡液（follicle fluid；FF）。  
 
产品内容
 
HEPENGBIO培养液（Reagent A） 毫升
产品说明书          1份
 
保存方式
 
保存在－20℃的冰箱里，有效保证6月
 
用户自备
 
35mm细胞培养皿：用于样品操作的容器
4℃微型台式离心机：用于样品操作
细胞培养箱：用于卵母细胞培养
 
实验步骤
 
实验开始前，将试剂盒里的HEPENGBIO培养液（Reagent A）从－20℃的冰箱里取出，置于37℃培养箱里均衡温度2小时。然后进行下列操作。
 
1． 准备好新鲜切除的动物卵巢组织
2． 在30分钟内，从卵泡中吸出卵丘卵母细胞复合体（cumulus oocyte complexes；COC）
3． 使用卵母细胞清理液清洗3次（注意：建议使用HEPENGBIO卵母细胞清理液－HEPENGBIO14009.3）
4． 滴入xx微升HEPENGBIO培养液（Reagent A）到35mm细胞培养皿中预热的矿物液（mineral oil）中
5． 转移4至6个COC到培养皿中的培养液里
6． 放进5％CO2细胞培养箱继续孵育12小时，温度37℃，湿度饱和
7． （选择步骤）评价卵丘扩展（cumulus expansion）和细胞成熟状况（注意：建议使用HEPENGBIO卵母细胞核成熟苔红素（orcein）荧光染色分析试剂盒－HEPENGBIO14025）
8． （选择步骤）移取COC，分离卵母细胞
9． （选择步骤）继续后续体外受精
10． 期待结果参考：
 

	时间	卵母细胞百分率（%）
Germinal Vesicle	0至5小时	100
Metaphase I	6小时	70
Anaphase I－Telophase I	8小时	70
Metaphase II	10至12小时	80
Penetration	1天	80
Male Pronuleus Formation		60
Cleavage		86
Blastocyst	7天