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内吞体（endosome）为功能上、形态上、生化结构上非均质性（heterogenous）细胞内细胞器组分，其功能在于将配体、受体、膜内容物进行归类整理。 内吞体的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得内吞体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的内吞体。
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO高密液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO中密液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO低密液（Reagent E） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
6毫升和14毫升超速离心管：用于超高速离心的容器
4℃（微型）台式离心机：用于样品制备
4℃超速离心机：用于样品制备
DOUNCE匀浆器：用于裂解（组织）细胞
实验步骤
一、 组织样品处理
1． 手术取出动物组织，避免或去除脂肪组织，秤重以确定1克组织重量（实验前最好使动物空腹12至24小时）
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项7）
10． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
11． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3800g
12． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
13． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为4300g
14． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
15． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为30000g
16． 小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）
17． 放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为285000g
18． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得内吞体组分
19． 加入5毫升HEPENGBIO高密液（Reagent C），充分混匀沉淀物
20． 转移到14毫升超速离心管
21． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO中密液（Reagent D）在HEPENGBIO高密液（Reagent C）的上面，避免震动
22． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO低密液（Reagent E）在HEPENGBIO中密液（Reagent D）的上面，避免震动
23． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）在HEPENGBIO低密液（Reagent E）的上面，直至加满，避免震动
24． 放进4℃超速离心机离心110分钟，速度为285000g
25． 小心取出超速离心管
26． 小心收集裂解液和低密液交界面和低密液和中密液交界面的内吞体样品带到6毫升超速离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得富集内吞体样品
27． 加入xx至xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
28． 放进4℃超速离心机离心50分钟，速度为285000g
29． 小心抽去上清液
30． 加入xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B），充分混匀沉淀物
31． 转移到1.5毫升离心管
32． 放进－70℃冰箱里保存
二、 细胞样品处理
1． 准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5 X 107），直至细胞生长铺满整个培养表面
2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3． 重复实验步骤2一次
4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个细胞生长表面
5． 置入37℃培养箱3分种
6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落，
7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入一个50毫升锥形离心管
9． 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞
12． 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
15． 涡旋震荡5秒，充分混匀
16． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
17． 在冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约20至40下）（注意：参见注意事项7）
18． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管
19． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3800g
20． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
21． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为4300g
22． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
23． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为30000g
24． 小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）
25． 放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为285000g
26． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得内吞体组分
27． 加入xx毫升HEPENGBIO高密液（Reagent C），充分混匀沉淀物
28． 转移到14毫升超速离心管
29． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO中密液（Reagent D）在HEPENGBIO高密液（Reagent C）的上面，避免震动
30． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO低密液（Reagent E）在HEPENGBIO中密液（Reagent D）的上面，避免震动
31． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）在HEPENGBIO低密液（Reagent E）的上面，直至加满，避免震动
32． 放进4℃超速离心机离心110分钟，速度为285000g
33． 小心取出超速离心管
34． 小心收集裂解液和低密液交界面和低密液和中密液交界面的内吞体样品带到6毫升超速离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得富集内吞体样品
35． 加入xx至xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
36． 放进4℃超速离心机离心50分钟，速度为285000g
37． 小心抽去上清液
38． 加入xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B），充分混匀沉淀物
39． 转移到1.5毫升离心管
40． 放进－70℃冰箱里保存
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO高密液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO中密液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO低密液（Reagent E） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
6毫升和14毫升超速离心管：用于超高速离心的容器
4℃（微型）台式离心机：用于样品制备
4℃超速离心机：用于样品制备
DOUNCE匀浆器：用于裂解（组织）细胞
实验步骤
一、 组织样品处理
1． 手术取出动物组织，避免或去除脂肪组织，秤重以确定1克组织重量（实验前最好使动物空腹12至24小时）
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项7）
10． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
11． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3800g
12． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
13． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为4300g
14． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
15． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为30000g
16． 小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）
17． 放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为285000g
18． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得内吞体组分
19． 加入5毫升HEPENGBIO高密液（Reagent C），充分混匀沉淀物
20． 转移到14毫升超速离心管
21． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO中密液（Reagent D）在HEPENGBIO高密液（Reagent C）的上面，避免震动
22． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO低密液（Reagent E）在HEPENGBIO中密液（Reagent D）的上面，避免震动
23． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）在HEPENGBIO低密液（Reagent E）的上面，直至加满，避免震动
24． 放进4℃超速离心机离心110分钟，速度为285000g
25． 小心取出超速离心管
26． 小心收集裂解液和低密液交界面和低密液和中密液交界面的内吞体样品带到6毫升超速离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得富集内吞体样品
27． 加入xx至xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
28． 放进4℃超速离心机离心50分钟，速度为285000g
29． 小心抽去上清液
30． 加入xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B），充分混匀沉淀物
31． 转移到1.5毫升离心管
32． 放进－70℃冰箱里保存
二、 细胞样品处理
1． 准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5 X 107），直至细胞生长铺满整个培养表面
2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3． 重复实验步骤2一次
4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个细胞生长表面
5． 置入37℃培养箱3分种
6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落，
7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入一个50毫升锥形离心管
9． 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞
12． 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
15． 涡旋震荡5秒，充分混匀
16． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
17． 在冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约20至40下）（注意：参见注意事项7）
18． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管
19． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3800g
20． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
21． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为4300g
22． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
23． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为30000g
24． 小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）
25． 放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为285000g
26． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得内吞体组分
27． 加入xx毫升HEPENGBIO高密液（Reagent C），充分混匀沉淀物
28． 转移到14毫升超速离心管
29． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO中密液（Reagent D）在HEPENGBIO高密液（Reagent C）的上面，避免震动
30． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO低密液（Reagent E）在HEPENGBIO中密液（Reagent D）的上面，避免震动
31． 轻轻加入xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）在HEPENGBIO低密液（Reagent E）的上面，直至加满，避免震动
32． 放进4℃超速离心机离心110分钟，速度为285000g
33． 小心取出超速离心管
34． 小心收集裂解液和低密液交界面和低密液和中密液交界面的内吞体样品带到6毫升超速离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得富集内吞体样品
35． 加入xx至xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
36． 放进4℃超速离心机离心50分钟，速度为285000g
37． 小心抽去上清液
38． 加入xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B），充分混匀沉淀物
39． 转移到1.5毫升离心管
40． 放进－70℃冰箱里保存
