膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）和内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV）。正常外向膜性囊泡是通过去除细胞浆内容物，使之失去细内在的代谢系统，同时保持质膜的原始位相，有利于提供适合的底物，不会受到降解和代谢，建立动力机制，进行转运或摄入研究，例如微粒体组分用于V型ATP酶研究、线粒体组分用于F型ATP酶研究。而内侧外翻膜性囊泡是通过裂解细胞和细胞器后，质膜重新闭合形成内侧面外翻的囊泡状结构， 用于原发性转运系统的研究。

 

产品内容

 
HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 100 毫升
HEPENGBIO 平衡液（Reagent B） 60 毫升
HEPENGBIO 保存液（Reagent C） 20 毫升
产品说明书 1 份
 

保存方式

 
保存 HEPENGBIO 保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月
 

用户自备

 
50 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器4℃超速离心机：用于分离膜性囊泡DOUNCE 匀浆器：用于裂解细胞
 

实验步骤

 

一、正常外向膜性囊泡分离（线粒体和微粒体）

 
1. 准备好 50 毫升新鲜真菌/酵母样品
2. 在分光光度仪上测 OD₆₀₀＝1.0（1 OD＝1 X 107 细胞/毫升；总量为 5 X 10⁸ 细胞）
3. 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
4. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
5. 小心抽去上清液
6. 加入适量的 5 毫升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
7. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
8. 小心抽去上清液
9. 即刻放入液氮罐过夜
10. 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎细胞成粉末（注意：切莫使细胞冻融）
11. 放进一个 15 毫升锥形离心管
12. 加入 3 毫升预冷的 HEPENGBIO 平衡液（Reagent B）
13. 涡旋震荡 5 秒，充分混匀
14. 即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器
15. 在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约 80 下）
16. 将所有细胞匀浆物移入 15 毫升锥形离心管
17. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g
18. 小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管
19. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 10000g
20. 小心移出上清液到 2 个新的 1.5 毫升离心管，同时保留沉淀颗粒
21. 加入 500 微升 HEPENGBIO 保存液（Reagent C）到沉淀颗粒管――此为线粒体 RSOV 组分（注意： 可用于 F 型 ATP 酶研究）
22. 将含有上清液的 2 个 1.5 毫升离心管放进 4℃超速离心机离心 60 分钟，速度为 100000g
23. 小心抽去上清液
24. 分别加入 500 微升 HEPENGBIO 保存液（Reagent C）――此为微粒体 RSOV 组分（注意：可用于 V

型 ATP 酶研究）

25. 移取 10 微升进行蛋白质定量测定（注意：建议使用 HEPENGBIO Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－
HEPENGBIO30030.1）
26. 即刻放进－70℃冰箱里保存
 

二、内侧外翻膜性囊泡分离（质膜分离）

 
 
1. 准备好 50 毫升新鲜真菌/酵母样品
2. 在分光光度仪上测 OD₆₀₀＝1.0（1 OD＝1 X 107 细胞/毫升；总量为 5 X 10⁸ 细胞）
3. 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
4. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
5. 小心抽去上清液
6. 加入适量的 5 毫升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
7. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
8. 小心抽去上清液
9. 即刻放入液氮罐过夜
10. 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎细胞成粉末（注意：切莫使细胞冻融）
11. 放进一个 15 毫升锥形离心管