细胞培养中的主要微生物污染包括支原体（mycoplasma）、细菌、真菌、酵母和病毒等。在含有抗生素的培养液中，低水平的细菌污染则难以观察和发现。SYTO-9染料为一种自由穿透质膜，并特异性结合核酸的荧光染料，一旦结合，呈现强力的绿色荧光。细胞培养细菌污染定性荧光染色，通过SYTO-9对细菌核酸的染色，替代细菌培养，具有快速检测细胞培养中细菌的存在，在荧光显微镜下（激发波长485nm，散发波长500nm）下观察到绿色点状（dots）或杆状（rods）。
 
产品内容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）     毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B）   微升
HEPENGBIO稀释液（Reagent C）   毫升
产品说明书   1份
 
保存方式
 
保存在-20℃冰箱里，避免光照；有效保证6月
 
用户自备
 
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
载玻片和盖玻片：用于样品染色的载体
台式离心机：用于悬浮细胞操作
细胞培养板或培养皿：用于培养细胞的容器
荧光显微镜：用于观察荧光染色情况
 
实验步骤
 
实验开始前，将-20的试剂置于室温下冻融。然后移取xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO稀释液（Reagent C），混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，放进暗室里备用。
 
一、 贴壁细胞培养检测
 
1． 准备好待测细胞培养至50％铺满率 
2． 小心移取5毫升细胞培养容器里的培养液到15毫升锥形离心管
3． 放进台式离心机离心15分钟，速度为1000g
4． 小心抽掉上清液
5． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
6． 放进台式离心机离心15分钟，速度为1000g
7． 小心抽掉上清液
8． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
9． 移取20微升混匀液到洁净的载玻片上
10． 放进37培养箱孵育10分钟，使其晾干
11． 快速在酒精灯火上加热固定（注意：切忌过热处理）
12． 加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
13． 室温下孵育5分钟
14． 小心抽去清理液
15． 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在载玻片上，盖上盖玻片
16． 在室温下，暗室里孵育5分钟 
17． （选择步骤）移去盖玻片，小心抽去染色液
18． （选择步骤）小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
19． （选择步骤）小心抽去清理液
20． 封片处理
21． 置于荧光显微镜下观察染色情况（400至1000倍放大倍数）：激发波长485nm，散发波长500nm
胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等绿色荧光 
二、悬浮细胞培养检测
1． 将待测悬浮细胞（1 X 10⁵总量）移入到15毫升锥形离心管
2． 放进台式离心机离心15分钟，速度为1000g 
3． 小心抽去上清液
4． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
5． 放进台式离心机离心5分钟，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽去上清液
7． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
8． 移取20微升混匀液到洁净的载玻片上
9． 放进37培养箱孵育10分钟，使其晾干
10． 快速在酒精灯火上加热固定（注意：切忌过热处理）
11． 加上50微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
12． 室温下孵育5分钟
13． 小心抽去清理液
14． 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在载玻片上，盖上盖玻片
15． 在室温下，暗室里孵育5分钟 
16． （选择步骤）移去盖玻片，小心抽去染色液
17． （选择步骤）小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
18． （选择步骤）小心抽去清理液
19． 封片处理
20． 置于荧光显微镜下观察染色情况（400至1000倍放大倍数）：激发波长485nm，散发波长500nm
胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等绿色荧光