在基因的启动子区域（promotor region）通常存在一些富含重复双核苷酸“”的区域，称为“岛”（ island）。在人类基因组内，存在有近 3 万个岛。这些岛不仅是基因的一种标志，而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构，更是 DNA 甲基化的位置。岛甲基化形态的扫描分析是基因表达和表观基因组学的主要课题。

 

产品内容

 
HEPENGBIO 扩增液（Reagent A） 微升
HEPENGBIO 补充液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1 份
 

保存方式

 
保存在－20℃冰箱里；有效保证 6 月
 

用户自备

 
转化样品：经过亚硫酸盐转化的目标 DNA 分子特异引物：用于甲基化基因扩增的引导 DNA 分子PCR 仪：用于样品扩增
PCR 管或平板：用于 PCR 反应的容器
 

实验步骤

 
实验开始前，从－20℃冰箱中取出试剂，放进冰槽里融化。然后进行下列操作：
 
1. 针对一个样本，每次移出 xx 微升 HEPENGBIO 扩增液（Reagent A）到PCR 管
2. 加入 1 微升用户自备的的转化或野生型 DNA 样品（总量 100 纳克）
3. 分别加入 1 微升用户自备的甲基化特异性的引物 F 和引物 R（各 350 纳克或 25 微摩尔）

4. 再加入 xx 微升 HEPENGBIO 补充液（Reagent B）（反应总量为 25 微升）
5. 即刻放进微型台式离心机瞬时离心 5 秒，速度为 500g（或 2000RPM；例如 eppendorf 5415）
6. 加入 50 微升 PCR 级矿物油（注意：参见注意事项10）
7. 即刻进行热启动 PCR 反应：
 

温度（℃）	时间	循环
95	9 分钟	1
95	30 秒
Tm	30 秒	35
72	30 秒
72	5 分钟	1

 
8. 反应完毕后，移取 5 微升进行 1.8%琼脂糖凝胶电泳或 15%聚丙烯酰胺凝胶
9. 如果进行测序鉴定，胶回收 PCR 产物（建议使用 HEPENGBIO 高质纯化一步法胶回收试剂盒；
HEPENGBIO20051.1）
10. 分别移出 2 微升反应液到 2 个不同的新的 1.5 毫升离心管（每微升 100 纳克）
11. 加入 1 微升用户自备的甲基化特异性的巢式引物 F（每微升 350 纳克）到其中一个 1.5 毫升离心管，作好标记
12. 加入 1 微升用户自备的甲基化特异性的巢式引物 R（每微升 350 纳克）到另一个 1.5 毫升离心管，作好标记
13. 进行后续的直接测序反应