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多聚ADP核糖聚合酶-1（Poly (ADP-ribose) Polymerase；PARP；EC 2.4.2.30）是一种锌依赖性核酶，广泛存在于真核细胞中。PARP家属由18个成员，其中6个已经被证实，包括PARP-1（占90％）、PARP-2、PARP-4（VPARP）、PARP-5a/5b（tankyrase）等。PARP蛋白由4个结构域构成：DNA结合、切离、自修饰（automodification）、催化等结构域。其功能在于特异性地识别DNA损伤产生的单链或双链DNA断裂，并与之结合而激活，催化将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）转化成烟酰胺（nicotinamide）和多聚ADP核糖分枝聚合体（branched polymers of various poly (ADP-ribose)）的反应，由此引导各种DNA修复蛋白聚集到损伤部位，实施修复，同时调节染色质结构形成（chromatin structure formation）、 细胞分化、繁殖、发育、凋亡、基因表达等，以及对于心脑缺血的反应和肿瘤恶变的作用。抑制PARP活性，可以防止心衰、中风、败血症等引起的组织损害。基于人工合成底物ADP核糖对硝基苯酚（ADP-ribose-p-nitrophenol），在损伤的DNA存在的前提下，受到多聚ADP核糖聚合酶-1的作用，释放出显色产物对硝基苯酚（p-nitrophenol），通过分光光度仪检测吸光读数的变化（405nm 波长），来定量分析多聚ADP核糖聚合酶-1的活性。其反应系统为：
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent D） 微升
HEPENGBIO底物液（Reagent E） 微升
HEPENGBIO阴性液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO裂解液（Reagent B）、HEPENGBIO反应液（Reagent D）和HEPENGBIO底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO底物液（Reagent E）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
（微型）台式离心机：用于样品制备
比色皿或酶标板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
一、 样品准备
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入到一个液氮冻存管
5． 即刻放进液氮罐过夜
6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7． 放进一个15毫升锥形离心管
8． 加入预冷的xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
9． 转移到预冷的1.5毫升离心管
10． 强力涡旋震荡30秒，充分混匀
11． 置于冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）
12． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
13． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
14． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HEPENGBIO30030.1）
15． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长405nm，并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；HEPENGBIO底物液（Reagent E）避免光照；HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）室温下预热
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent E）
4． 加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在25℃温度下孵育2小时
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景读数
四、 样品测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent E）
4． 加入5微升待测样品（100微克蛋白）（注意：样品须清澈）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在25℃温度下孵育2小时
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数
五、计算样品活性
六、 酶标板测定
1． 在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到96孔板中
3． 分别加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
4． 分别加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent E）
5． 分别加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）或待测样品（100微克蛋白）到相应孔中（注意：样品须清澈）
6． 轻轻摇动酶标板
7． 在25℃温度下孵育2小时
8． 即刻放进酶标仪检测：获得背景读数和样品读数
9． 活性计算：
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent D） 微升
HEPENGBIO底物液（Reagent E） 微升
HEPENGBIO阴性液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO裂解液（Reagent B）、HEPENGBIO反应液（Reagent D）和HEPENGBIO底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO底物液（Reagent E）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
（微型）台式离心机：用于样品制备
比色皿或酶标板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
一、 样品准备
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入到一个液氮冻存管
5． 即刻放进液氮罐过夜
6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7． 放进一个15毫升锥形离心管
8． 加入预冷的xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
9． 转移到预冷的1.5毫升离心管
10． 强力涡旋震荡30秒，充分混匀
11． 置于冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）
12． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
13． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
14． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HEPENGBIO30030.1）
15． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长405nm，并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；HEPENGBIO底物液（Reagent E）避免光照；HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）室温下预热
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent E）
4． 加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在25℃温度下孵育2小时
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景读数
四、 样品测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent E）
4． 加入5微升待测样品（100微克蛋白）（注意：样品须清澈）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在25℃温度下孵育2小时
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数
五、计算样品活性
六、 酶标板测定
1． 在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到96孔板中
3． 分别加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
4． 分别加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent E）
5． 分别加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent F）或待测样品（100微克蛋白）到相应孔中（注意：样品须清澈）
6． 轻轻摇动酶标板
7． 在25℃温度下孵育2小时
8． 即刻放进酶标仪检测：获得背景读数和样品读数
9． 活性计算：
