膜性囊泡(membrane vesicle)分成正常外向膜性囊泡(Right-side out;RSOV)和内侧外翻膜性囊泡(In-side out;IOV)。正常外向膜性囊泡是通过去除细胞浆内容物,使之失去细内在的代谢系统,同时保持质膜的原始位相,有利于提供适合的底物,不会受到降解和代谢,建立动力机制,进行转运或摄入研究,例如微粒体组分用于V型ATP酶研究、线粒体组分用于F型ATP酶研究。而内侧外翻膜性囊泡是通过裂解细胞和细胞器后,质膜重新闭合形成内侧面外翻的囊泡状结构,广泛用于原发性转运系统的研究。 
 
产品内容
 
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO平衡液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent C) 毫升
产品说明书 1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO保存液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;有效保证6月
 
用户自备
 
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
1.5毫升离心管:用于样品操作和保存的容器
4℃超速离心机:用于分离膜性囊泡
DOUNCE匀浆器:用于裂解组织
 
实验步骤
 
一、正常外向膜性囊泡分离(线粒体和微粒体)
 
1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定1克组织重量
2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
3. (选择步骤)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一个液氮冻存管
5. 即刻放入液氮罐过夜
6. 次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎组织成粉末(注意:切莫使组织冻融)
7. 放进一个15毫升锥形离心管
8. 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 涡旋震荡5秒,充分混匀
10. 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
11. 在冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)
12. 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
13. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1000g
14. 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
15. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为10000g
16. 小心移出上清液到2个新的1.5毫升离心管,同时保留沉淀颗粒
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)到沉淀颗粒管――
18. 将含有上清液的2个1.5毫升离心管放进4℃超速离心机离心60分钟,速度为100000g
19. 小心抽去上清液
20. 分别加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
21. 移取10微升进行蛋白质定量测定(注意:建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-HEPENGBIO30030.1)
22. 即刻放进-70℃冰箱里保存
 
二、内侧外翻膜性囊泡分离(质膜分离)
 
1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定1克组织重量
2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
3. (选择步骤)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一个液氮冻存管
5. 即刻放入液氮罐过夜
6. 次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎组织成粉末(注意:切莫使组织冻融)
7. 放进一个15毫升锥形离心管
8. 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 涡旋震荡5秒,充分混匀
10. 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
11. 在冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)
12. 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
13. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1000g
14. 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
15. 放进4℃台式离心机离心30分钟,速度为10000g
16. 小心抽去上清液
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
18. 连续-70℃至37℃冻融4次――
19. 移取10微升进行蛋白质定量测定(注意:建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒
20. 即刻放进-70℃冰箱里保存
21. (选择步骤)进行IOV组分纯化(建议使用HEPENGBIO IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒
 
             
                产品内容
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO平衡液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent C) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO保存液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
1.5毫升离心管:用于样品操作和保存的容器
4℃超速离心机:用于分离膜性囊泡
DOUNCE匀浆器:用于裂解组织
实验步骤
一、正常外向膜性囊泡分离(线粒体和微粒体)
1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定1克组织重量
2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
3. (选择步骤)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一个液氮冻存管
5. 即刻放入液氮罐过夜
6. 次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎组织成粉末(注意:切莫使组织冻融)
7. 放进一个15毫升锥形离心管
8. 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 涡旋震荡5秒,充分混匀
10. 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
11. 在冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)
12. 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
13. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1000g
14. 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
15. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为10000g
16. 小心移出上清液到2个新的1.5毫升离心管,同时保留沉淀颗粒
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)到沉淀颗粒管――
18. 将含有上清液的2个1.5毫升离心管放进4℃超速离心机离心60分钟,速度为100000g
19. 小心抽去上清液
20. 分别加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
21. 移取10微升进行蛋白质定量测定(注意:建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-HEPENGBIO30030.1)
22. 即刻放进-70℃冰箱里保存
二、内侧外翻膜性囊泡分离(质膜分离)
1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定1克组织重量
2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
3. (选择步骤)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入一个液氮冻存管
5. 即刻放入液氮罐过夜
6. 次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)碾碎组织成粉末(注意:切莫使组织冻融)
7. 放进一个15毫升锥形离心管
8. 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO平衡液(Reagent B)
9. 涡旋震荡5秒,充分混匀
10. 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
11. 在冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)
12. 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
13. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1000g
14. 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
15. 放进4℃台式离心机离心30分钟,速度为10000g
16. 小心抽去上清液
17. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent C)――
18. 连续-70℃至37℃冻融4次――
19. 移取10微升进行蛋白质定量测定(注意:建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒
20. 即刻放进-70℃冰箱里保存
21. (选择步骤)进行IOV组分纯化(建议使用HEPENGBIO IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒


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