腺苷三磷酸酶，又称为ATP酶（adenosine triphosphatase；ATPase或ATP phosphohydrolase；EC3.6.1.3），属于磷酸水解酶，可以催化含磷的酸酐分解，即催化三磷酸腺苷分解为二磷酸腺苷和无机磷。ATP酶的去磷酸化反应释放出能量，成为细胞生命代谢的能源。ATP酶为跨膜蛋白（transmembrane），帮助传输各种代谢分子进出细胞。根据ATP酶的结构和功能，分为五类不同的ATP酶，即F、V、A、P和E型。P型，又称为E1E2 型，存在于细菌和真核细胞膜和细胞器上，其功能在于水解ATP获得能量，跨膜运输各种化学分子，包括Ca²⁺传输性、Na⁺-K⁺ /H⁺-K⁺传输性、H⁺传输性和所有细菌型等，其中胃氢/钾ATP酶，一种与胃酸分泌相关的质子泵，属于这一类型。V型，又称为V1V0型，主要存在于真核细胞的液泡（vacuole）中。A型，又称为A1A0型，存在于古生菌（archaea）中。E型，为细胞表面的酶。V型，又称为V1V0型，也称为氢V型ATP酶，主要存在于所有真核细胞的囊泡（vacuole或vesicle）中。F型ATP酶（F type ATPase），又称为ATP合成酶（ATP synthase）、F1F0 ATP酶（F1F0 ATPase）和线粒体呼吸链复合物V（complex V），主要在线粒体、叶绿体或细菌细胞膜上，进行氧化磷酸化或光合作用。其中叶绿体ATP合酶（chloroplast ATP synthase），又称为CF1F0ATP酶。F型ATP酶主要有两个结构域：F0为质子通道，由15亚体蛋白构成，包括I1II1III12IV1等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。CF型ATP酶的主要功能在于通过跨膜质子梯度，形成光合成电子传导（photosynthetic electron transport），产生细胞所需的能量ATP。基于ATP，在寡霉素参与下，受到F型ATP酶的水解，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm），来定量分析CF型ATP酶活性。其反应系统为：
 
产品内容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）      毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent D）      毫升
HEPENGBIO阴性液（Reagent E）   毫升
HEPENGBIO底物液（Reagent F） 微升
HEPENGBIO专性液（Reagent G）   微升
产品说明书    1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；HEPENGBIO反应液（Reagent D），避免光照，有效保证6月
 
用户自备
 
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
尼龙丝或60微米尼龙网：用于去除植物裂解残渣
小型漏斗：用于过滤的装置
微型台式离心机：用于样品制备
培养箱：用于反应孵育
比色皿：用于光谱分析的容器
分光光度仪：用于光谱分析
 
实验步骤
 
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；HEPENGBIO反应液（Reagent D）注意避光。然后进行下列操作。
 
一、 样品准备
 
1． 准备好新鲜的植物叶片组织，并秤重以确定200毫克组织重量 
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 用刀片切碎组织（注意：建议去除叶茎）
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
9． 置于冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下） 
10． （选择步骤）准备1个小型漏斗，内衬尼龙丝或60微米尼龙网，置于50毫升锥形离心管上
11． （选择步骤）将所有组织匀浆液移入到小型漏斗里过滤（注意：可以使用4层纱布替代）
12． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为200g
13． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物） 
14． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g
15． 小心抽去上清液，保留绿色沉淀颗粒，避免光照——
16． 加入xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B），充分混匀沉淀颗粒群
17． （选择步骤）进行叶绿素定量测定（建议使用HEPENGBIO植物叶绿体总蛋白定量检测试剂盒－HEPENGBIO16009）
18． 即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里保存
 
二、测定准备
 
1． 准备好上述待测样品，放进60℃恒温水槽孵育4分钟，然后放进冰槽里备用 
2． 设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长为340nm，间隔2分钟，读数6次（共10分钟），并置零
3． HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度
 
三、 背景对照测定
 
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent F）
4． 放进37℃培养箱里静置3分钟
5． 加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent E）
6． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：340波长读数0分钟 －340波长读数10分钟
 
四、 样品总活性测定
 
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent F）
4． 放进37℃培养箱里静置3分钟
5． 加入100微升待测样品（注意：100微克叶绿体蛋白；样品须溶解）
6． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：340波长读数0分钟 －340波长读数10分钟
 
五、 样品非特异活性测定
 
实验开始前，移取100微升待测样品（注意：100微克叶绿体蛋白；样品须溶解）到1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO专性液（Reagent G），混匀后，放进37℃培养箱里孵育15分钟。然后置于冰槽里备用

1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent F）
4． 放进37℃培养箱里孵育3分钟
5． 加入120微升上述预处理的待测样品
6． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：340波长读数0分钟 －340波长读数10分钟
 
六、 计算样品活性
 
1）样品活性（总活性和非特异活性）
 
 
2）样品特异活性
 
 
七、 酶标板测定
 
1） 样品总活性测定
 
1． 在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品总活性
2． 分别移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到96孔板中
3． 分别加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
4． 分别加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent F）
5． 轻轻摇动96孔酶标板
6． 在37℃温度下孵育3分钟
7． 分别加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent E）或待测样品（注意：50微克叶绿体蛋白）到相应孔中（注意：样品须清澈）
8． 轻轻摇动酶标板
9． 即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和10分钟读数
10． 背景对照和样品总活性实际读数：340波长读数0分钟 －340波长读数10分钟
11． 活性计算
 
 
 
 
2） 样品非特异活性测定
 
实验开始前，移取25微升待测样品（注意：50微克叶绿体蛋白；样品须溶解）到1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO专性液（Reagent G），混匀后，放进37℃培养箱里孵育15分钟。然后置于冰槽里备用
 
1． 在96孔酶标板上做好相应标记：待测样品
2． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到96孔板中
3． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）
4． 加入xx微升HEPENGBIO底物液（Reagent F）
5． 轻轻摇动96孔酶标板
6． 在37℃温度下孵育3分钟
7． 加入30微升上述预处理的待测样品
8． 轻轻摇动酶标板
9． 即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和10分钟读数
10． 样品非特异活性实际读数：340波长读数0分钟 －340波长读数10分钟
11． 活性计算
 
 
 
3） 样品特异活性计算