抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate resistant acid phosphatase；TRAP）是一种在哺乳动物内表达的糖化单体金属蛋白酶，970 多碱基，320 多氨基酸，分子量为 35kD。作为破骨细胞的标志，抗酒石酸酸性磷酸酶与破骨细胞调节的骨resorption 活性和骨生成代谢有关。抗酒石酸酸性磷酸酶是以酶原形式合成，通过蛋白酶裂解和还原后活化。在酸性环境下，催化磷酸酯键的水解，产生醇和释放磷酸。其特征性为酒石酸抗性而与其它酸性磷酸酶区别。抗酒石酸酸性磷酸酶在破骨细胞（osteoclast）、活化的巨噬细胞、神经细胞以及怀孕期的猪内皮层子宫内膜（endometrium）高度表达。在网状内皮组织增殖（leukaemic reticuloendotheliosis）或毛细胞性白血病（ hairy cell leukaemia）、戈谢病（ Gaucher’s disease）、爱兹性脑病（ HIV-induced encephalopathy）、骨巨细胞瘤（osteoclastoma）、骨质疏松症（osteoporosis）和代谢性骨病等病人体内抗酒石酸酸性磷酸酶显著增高。基于底物萘酚 AS-MX 磷酸盐（naphthol AS-MX phosphate），在酸性环境和酒石酸（tartrate）存在的条件下，酸性磷酸酶催化其水解，释放出萘酚（naphthol-AS），进而与重氮盐耐晒红紫（Fast red violet）偶联，于是在酶的活动处形成不溶性紫红色沉淀的偶氮染料，由此证明抗酒石酸酸性磷酸酶活性。其反应体系为：
 产品内容
HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO 固着液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO 反应液（Reagent C） 微升
HEPENGBIO 染色液（Reagent D） 毫升
产品说明书 1 份
 
 

保存方式

 
 
保存 HEPENGBIO 反应液（Reagent C）和HEPENGBIO 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免反复冻融， 避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月
 

用户自备

 
甲基绿复染试剂盒（HEPENGBIO40010）：用于常规染色后复染
1.5 毫升离心管：用于配制染色工作液的容器恒温培养箱：用于反应孵育
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析
 

实验步骤

 
 
实验开始前，将试剂盒里的 HEPENGBIO 反应液（Reagent C）和 HEPENGBIO 染色液（Reagent D）从－20℃ 的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化，并避光。然后移取 毫升 HEPENGBIO 染色液（Reagent D）到 1.5 毫升离心管，加入 微升 HEPENGBIO 反应液（Reagent C），充分混匀后，标记为 HEPENGBIO 染色工作液，室温下，置入暗室。然后进行下列操作：
 
 

操作一：细胞载玻片染色一、 样本固着处理

 
1. 取出待测的细胞载玻片
2. 小心加上 微升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
3. 小心移去载玻片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）
4. 小心加上 微升 HEPENGBIO 固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
5. 室温下，孵育 2 分钟
6. 小心移去载玻片上的 HEPENGBIO 固着液（Reagent B）
7. 小心加上 微升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），清洗样品表面
8. 小心移去载玻片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）
9. 重复实验步骤 7 至 8 一次二、样本染色处理
1. 小心加上 微升 HEPENGBIO 染色工作液，铺满整个载玻片样品表面
2. 在 37℃恒温培养箱孵育 15 分钟；或直至可见紫红色（注意：避免光照）
3. 小心移去载玻片上的 HEPENGBIO 染色工作液
4. 室温下，加上 微升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），清洗样品表面
5. 小心移去载玻片上的 HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 三、 样本复染处理（选择步骤）
1. 样本复染处理（甲基绿）
2. 放上盖玻片或封片
3. 即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现紫红色，背景黄色，核为绿色
 
 

操作二：24 孔细胞培养板染色一、样本固着处理