细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。
 
产品内容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）     毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）     毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent C）     微升
HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）     毫升
HEPENGBIO保存液（Reagent E） 毫升
产品说明书  1份
 
保存方法
 
保存HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent C）避免光照，有效保证6月
 
用户自备
 
HANKS平衡盐溶液（HEPENGBIO12022）或PBS缓冲溶液（HEPENGBIO12033）：用于清洗细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
 
 
 
实验步骤
 
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）置入冰槽里融化。移出xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C）和xx微升HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D），混匀后标记为1号工作液；再移出xx微升HEPENGBIO保存液（Reagent E）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C），混匀后标记为2号工作液。工作液置于暗室里，避免光照。然后进行下列操作。
 
1． 准备1瓶25cm²细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（约1百万细胞数）
2． 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集漂浮细胞）
3． 加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
4． 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管
5． 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到细胞培养瓶，铺满整个培养平面
6． 置入37℃培养箱1分种
7． 振动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入到上述15毫升锥形离心管（悬浮细胞从这一步骤开始）
9． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀
12． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入500微升1号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群（可以移入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管）
15． 在暗室里室温下孵育60分钟
16． 加入500微升2号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀
17． 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
18． 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上