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糖原合成酶激酶3（glycogen synthase kinase 3；GSK；EC 2.7.11.26）属于丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家属成员之一。其目标蛋白为糖原合成酶和活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T lymphocytes；NFAT），进行磷酸化后，抑制其功能，同时调控细胞对DNA损伤的反应、生物发育的组织排列（tissue patterning）、蛋白合成、细胞分化和繁殖等。糖原合成酶激酶3从酵母到人体高度进化保留，果蝇中GSKΒ同源蛋白为Shaggy（Zeste White 3），在Wnt信号通路中磷酸化β-catenin，导致后者泛素化后降解，防止β-catenin进入细胞核激活转录因子。糖原合成酶激酶3本身受到胰岛素、生长因子、蛋白激酶B（protein kinase B）/v-akt鼠源胸腺瘤病毒肿瘤基因同源体（akt）调控。糖原合成酶激酶3分成两种异构体：糖原合成酶激酶3α和β，其结构相似，功能不同。糖原合成酶激酶3β与tau蛋白磷酸化、能量代谢、神经细胞发育、机体形状构成等有关。糖原合成酶激酶3β功能异常将导致阿兹罕默综合征等疾病。其磷酸化目标序列为GPHRSTPESRAAV。基于底物GPHRSTPESRAAV，在ATP和GSK3α抑制剂Aloisine A的存在下，受到GSK3β激酶的磷酸化，获得产物磷酸化多肽，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析糖原合成酶激酶3β的特异活性。其反应方式为：
GSK3β
GPHRSTPESRAAV + ATP → GPHRSTPEpSRAAV + ADP
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
（高吸收峰） （低吸收峰）
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 120毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 4毫升
HEPENGBIO酶促液（Reagent D） 500微升
HEPENGBIO反应液（Reagent E） 500微升
HEPENGBIO底物液（Reagent F） 500微升
HEPENGBIO阴性液（Reagent G） 500微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，严格避免光照和反复冻融；有效保证6月
用户自备
GSK3β激酶：用于抑制剂筛选
1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离
（微型）台式离心机：用于细胞预处理
200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器
分光光度仪或酶标仪：用于样品光度分析
实验步骤
一、 待测样品准备
1． 准备好75cm2细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 107细胞）
2． 小心加入3毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：避免使用胰酶消化）
5． 加入3毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞
6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入100至500微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B），充分混匀（注意：可以调节蛋白浓度）
10． 转移到预冷的1.5毫升离心管
11． 强力涡旋震荡15秒
12． 置于冰槽里孵育30分钟
13． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取100至500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HEPENGBIO30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
pH 7.5条件下，每分钟内能够氧化1微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作为一个活性单位
GSK3β
GPHRSTPESRAAV + ATP → GPHRSTPEpSRAAV + ADP
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
（高吸收峰） （低吸收峰）
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 120毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 4毫升
HEPENGBIO酶促液（Reagent D） 500微升
HEPENGBIO反应液（Reagent E） 500微升
HEPENGBIO底物液（Reagent F） 500微升
HEPENGBIO阴性液（Reagent G） 500微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，严格避免光照和反复冻融；有效保证6月
用户自备
GSK3β激酶：用于抑制剂筛选
1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离
（微型）台式离心机：用于细胞预处理
200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器
分光光度仪或酶标仪：用于样品光度分析
实验步骤
一、 待测样品准备
1． 准备好75cm2细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 107细胞）
2． 小心加入3毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：避免使用胰酶消化）
5． 加入3毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞
6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入100至500微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B），充分混匀（注意：可以调节蛋白浓度）
10． 转移到预冷的1.5毫升离心管
11． 强力涡旋震荡15秒
12． 置于冰槽里孵育30分钟
13． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取100至500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用HEPENGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HEPENGBIO30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
pH 7.5条件下，每分钟内能够氧化1微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作为一个活性单位
