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冻存保护（Cryopreservation）是长期储藏和保存生物活体材料的基本手段。但是，在深低温（-80℃以下）冻存过程中活体细胞将受到物理或化学性伤害诸如冰结晶体的形成、渗透压的变化以及化学物毒性等，尤其是致命性的活体细胞活内冰产生，所导致牵延和缩水等物理性损伤。作为冻存保护剂之一的甘油（glycerol）被证实能够阻止冰晶体的发生。使用两性离子（zwitterion）TES和TRIS作为缓冲系统，加以二糖类分子和蛋黄液（egg yolk），用于维持精子细胞结构功能完整性、运动能力、存活率、穿透力、人工授精能力和繁殖能力（fecundity）等。
产品内容
HEPENGBIO冻存液（Reagent A）  毫升
产品说明书            1份
保存方式
保存HEPENGBIO冻存液（Reagent A）在－20℃的冰箱里，有效保证6月
用户自备
2毫升冻存管：用于精子细胞冷冻储藏的容器
液氮罐：用于精子细胞深冻储存
实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的HEPENGBIO冻存液（Reagent A）从－20℃的冰箱里取出，置于室温下预热。然后进行下列操作。
1． 准备好新鲜收集（1小时内）的精液到15毫升锥形离心管
2． 放进37℃培养箱孵育30分钟
3． 移取1毫升（10 X 10⁶/毫升）到2毫升冻存管
4． 一滴一滴加入xx毫升HEPENGBIO冻存液（Reagent A），混匀
5． 室温下静置10分钟
6． 转移到降温控制冰箱，降温速度为1度/分钟
7． 直至降温到-80℃
8． 即刻转移到液氮罐里长期保存
注意事项
1． 本产品为20毫升规格
2． 所有冻存操作和使用工具均须在严格无菌状态下进行
3． 操作时，避免污染母液
4． 可以按照1：1比例加入HEPENGBIO冻存液（Reagent A），例如1毫升精子细胞悬液加入1毫升HEPENGBIO冻存液（Reagent A）
5． 解冻的基本原则是快速放进37℃恒温水槽瞬时解冻，这样可以确保细胞的存活质量
6． 本公司提供系列精子细胞冻存试剂产品