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HEPENGBIO体液氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒
产品说明书
主要用途
HEPENGBIO体液氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，受到活性氧的氧化下，产生荧光，来定量检测活性氧族的生成和增加的方法。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。活性氧特异性探针荧光染料2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA），一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定活性氧族的浓度。
产品内容
HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） 5毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B） 50微升
HEPENGBIO稀释液（Reagent C） 1毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
抗凝管：用于采血储存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和工作液配制的容器
培养箱：用于反应孵育
（微型）台式离心机：用于样品操作
黑色96孔板：用于样品荧光染色的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析
实验步骤
一、 样品准备
选择一：血浆样品
1． 准备好抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升上述制备的血浆到新的1.5毫升离心管
7． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
8． 放在冰槽里待测
选择二：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管
2． 抽取1毫升血液，置于储存管里
3． 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
4． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
7． 移取10微升上述制备的血清到新的1.5毫升离心管
8． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
9． 放在冰槽里待测
选择三：尿液/脑脊液/唾液/精液样品
1． 准备好1.5毫升离心管
2． 移取1毫升液体到离心管
3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升到新的1.5毫升离心管
7． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
8． 放在冰槽里待测
选择四：细胞培养上清
1． 准备1瓶25cm2细胞培养瓶的新鲜待测细胞
2． 小心移取细胞培养液到15毫升锥形离心管
3． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为300g
4． 小心移取上清液到新的15毫升锥形离心管
5． 移取10微升到新的1.5毫升离心管
6． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
7． 放在冰槽里待测
8． 放进37℃培养箱里备用（1小时内）
二、 样品测定
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent B）置于手心融化，HEPENGBIO稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出10微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入90微升HEPENGBIO稀释液（Reagent C），混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。
1． 准备1个黑色96孔板
2． 加入100微升上述制备的待测样品
3． 加入10微升HEPENGBIO染色工作液
4． 轻轻摇动黑色96孔板，混匀
5． 放进37℃细胞培养箱里孵育20分钟
6． 即刻放进荧光酶标仪检测：（激发波长490nm，散发波长530nm）――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 孵育时，避免光照
4． 测试前，细胞培养液须新鲜收集，1小时内为最佳
5． 培养液上清须澄清
6． 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化
7． 建议染色完成后，即刻进行荧光分析
8． 用户可以使用维生素E作为阴性对照
9． 本公司同时提供体液活性氧高质荧光测定试剂盒，满足不同用户需求
10． 本公司提供系列活性氧分析试剂产品
产品信息价格说明书等相关资料，可以联系客服咨询索取。
HEPENGBIO体液氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒
产品说明书
主要用途
HEPENGBIO体液氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，受到活性氧的氧化下，产生荧光，来定量检测活性氧族的生成和增加的方法。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。活性氧特异性探针荧光染料2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA），一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定活性氧族的浓度。
产品内容
HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） 5毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B） 50微升
HEPENGBIO稀释液（Reagent C） 1毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
抗凝管：用于采血储存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和工作液配制的容器
培养箱：用于反应孵育
（微型）台式离心机：用于样品操作
黑色96孔板：用于样品荧光染色的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析
实验步骤
一、 样品准备
选择一：血浆样品
1． 准备好抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升上述制备的血浆到新的1.5毫升离心管
7． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
8． 放在冰槽里待测
选择二：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管
2． 抽取1毫升血液，置于储存管里
3． 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
4． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
7． 移取10微升上述制备的血清到新的1.5毫升离心管
8． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
9． 放在冰槽里待测
选择三：尿液/脑脊液/唾液/精液样品
1． 准备好1.5毫升离心管
2． 移取1毫升液体到离心管
3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升到新的1.5毫升离心管
7． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
8． 放在冰槽里待测
选择四：细胞培养上清
1． 准备1瓶25cm2细胞培养瓶的新鲜待测细胞
2． 小心移取细胞培养液到15毫升锥形离心管
3． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为300g
4． 小心移取上清液到新的15毫升锥形离心管
5． 移取10微升到新的1.5毫升离心管
6． 加入90微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A），混匀
7． 放在冰槽里待测
8． 放进37℃培养箱里备用（1小时内）
二、 样品测定
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent B）置于手心融化，HEPENGBIO稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出10微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入90微升HEPENGBIO稀释液（Reagent C），混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。
1． 准备1个黑色96孔板
2． 加入100微升上述制备的待测样品
3． 加入10微升HEPENGBIO染色工作液
4． 轻轻摇动黑色96孔板，混匀
5． 放进37℃细胞培养箱里孵育20分钟
6． 即刻放进荧光酶标仪检测：（激发波长490nm，散发波长530nm）――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 孵育时，避免光照
4． 测试前，细胞培养液须新鲜收集，1小时内为最佳
5． 培养液上清须澄清
6． 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化
7． 建议染色完成后，即刻进行荧光分析
8． 用户可以使用维生素E作为阴性对照
9． 本公司同时提供体液活性氧高质荧光测定试剂盒，满足不同用户需求
10． 本公司提供系列活性氧分析试剂产品
