考马斯亮蓝染料G-250（Coomassie Brilliant Blue G-250）是一种与蛋白质结合的化学染料。它的三苯甲烷（triphenylmethane）基团，主要与蛋白质的非极性结构结合。而它的阴离子磺酸盐（anion sulfonate）基团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸，尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。在酸性环境下，其最大吸收波长从465nm转换为595nm。Bradford提出的方法的最大优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。较之Lowry，Hartree-Lowry和 BCA，更为敏感。
 
产品内容
 
HEPENGBIO反应液（Reagent A）   毫升
HEPENGBIO标准液（Reagent B）     毫升
HEPENGBIO补充液（Reagent C）    毫升
产品说明书     1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO标准液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO反应液（Reagent A），避免光照；有效保证3月
 
用户自备
 
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
比色皿或96孔板：用于样品比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
 
实验步骤
 
一、96孔板微量测定
 
A．建立标准样品曲线
1．将－20℃冰箱里试剂盒中的HEPENGBIO标准液（Reagent B）置入冰槽里融化
2．准备1个96孔板，做好相应的标记
3．按下表配制标准样品反应液
1）分别移取适量的HEPENGBIO标准液（Reagent B）到96孔板里指定序号的样品孔里
2）分别移取适量的HEPENGBIO补充液（Reagent C）到96孔板里指定序号的样品孔里
3）最后分别加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent A）
 

序号	HEPENGBIO标准液（Reagent B）	HEPENGBIO补充液（Reagent C）	HEPENGBIO反应液(Reagent A)	标准样品蛋白质含量 （微克）
1	xx微升	0	xx微升	10
2	xx微升	xx微升	xx微升	5
3	xx微升	xx微升	xx微升	2.5
4	xx微升	xx微升	xx微升	1.25
7	0	xx微升	xx微升	0

4．轻轻摇动96孔板，混匀反应物
5．室温下暗室里孵育5分钟
6．即刻放进酶标仪测定：波长为595nm
7．构建蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质含量（微克）
 
B．样品测定
1． 将待测样品置入冰槽里融化
2． 分别移取10微升待测样品到96孔板里指定序号的样品孔里 
3． 分别加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent A）
4． 轻轻摇动96孔板，混匀反应物
5． 室温下暗室里孵育5分钟
6． 即刻放进酶标仪测定：波长为595nm
7． 根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以10微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项4）
 
二、比色皿标准测定
 
A．建立标准样品曲线
1．将－20℃冰箱里试剂盒中的HEPENGBIO标准液（Reagent B）置入冰槽里融化
2．准备好1毫升比色皿
3．按下表配制标准样品反应液
1）分别移取适量的HEPENGBIO标准液（Reagent B）到1毫升比色皿
2）分别加入适量的HEPENGBIO补充液（Reagent C）
3）最后分别加入xx毫升HEPENGBIO反应液（Reagent A）
 

序号	HEPENGBIO标准液（Reagent B）	HEPENGBIO补充液（Reagent C）	HEPENGBIO反应液 （Reagent A）	标准样品蛋白质含量 （微克）
1	xx微升	0	xx毫升	25
2	xx微升	xx微升	xx毫升	12.5
3	xx微升	xx微升	xx毫升	6.25
4	xx微升	xx微升	xx毫升	3.125
5	0	xx微升	xx毫升	0

4．轻轻上下倾倒比色皿，混匀反应物
5．室温下暗室里孵育5分钟
6．即刻放进分光光度仪测定：波长为595nm
7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质含量（微克）
 
B．样品测定
1．将待测样品置入冰槽里融化
2．移取25微升待测样品到1毫升比色皿里   
4．加入xx毫升HEPENGBIO反应液（Reagent A）
5．轻轻上下倾倒比色皿，混匀反应物
6．室温下暗室里孵育5分钟
7．即刻放进分光光度仪测定：波长为595nm
8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以25微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项4）