超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM-H2DCFDA）是取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。
 
产品内容
 
HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）      3毫升
HEPENGBIO补充液（Reagent B）      3毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent C）     40微升
产品说明书 1份
 
保存方式
 
保存在－20℃冰箱里，HEPENGBIO染色液（Reagent C），严格避免光照；有效保证6月
 
用户自备
 
黑色96孔板：用于样品操作的容器
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体
荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度
 
实验步骤
 
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂放进冰槽里融化，避免光照；同时从－80℃冰箱里取出待测的线粒体，放进冰槽里融化。然后进行下列操作。
1． 准备1个黑色96孔板，标记好背景对照孔和待测样品孔
2． 分别加入150微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）
3． 移取50微升线粒体悬液（总量为50微克线粒体蛋白）到黑色96孔板的相应待测样品孔里
4． 加入50微升HEPENGBIO补充液（Reagent B）到黑色96孔板的相应背景对照孔里
5． 分别加入2微升HEPENGBIO染色液（Reagent C）到上述孔里
6． 放进37℃培养箱里孵育15分钟，避免光照
7． 选择下列方式之一进行操作：
a) 使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：
1）移取10微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片
2）激发波长490nm，散发波长530nm――
绿色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高
 
b) 或使用荧光酶标仪检测（定量检测）：
1）直接放进荧光酶标仪：激发波长490nm，散发波长530nm――
样品RFU－对照RFU＝实际线粒体RFU：增高，表明活性氧族（ROS）含量高