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HEPENGBIO冰冻切片细胞色素氧化酶活性染色试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO冰冻切片细胞色素氧化酶活性染色试剂是一种旨在使用细胞色素C催化人工电子供体染料二氨基联苯胺的非酶源性自然氧化，形成棕褐色不溶性产物，来分析冰冻组织样品中细胞色素氧化酶活性的方法。主要适用于动物组织细胞的细胞色素氧化酶活性的定性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）是氧化呼吸链的酶部分的总称。其存在于真核生物的细胞线粒体上，主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。二氨基联苯胺（3,3’-diaminobenzidine，DAB）是人工电子供体染料，通过与金属蛋白，例如含铁蛋白细胞色素C中的物理性结合，产生非酶源性自然氧化，同时提供电子（细胞色素C作为电子受体）于呼吸链的电子传递系统，由此呈现出颜色变化和沉积，形成棕褐色不溶性产物，且不受乙醇影响。在DAB自然氧化的同时，产生活性氧，例如过氧化氢，由过氧化氢酶防止其聚集。在大量氧化型DAB的存在下，通过细胞色素氧化酶的作用，亚铁细胞色素C被氧化成正铁细胞色素C。由此氧化型DAB棕褐色不溶性产物被用于检测组织细胞中细胞色素氧化酶的活性。
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A）  100毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B）      10毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent C）    4瓶
HEPENGBIO固着液（Reagent D）   10毫升
产品说明书    1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）和HEPENGBIO反应液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
培养箱：用于反应孵育
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
染色开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化；移取2.5毫升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到1瓶HEPENGBIO反应液（Reagent C）里，混匀，标记为HEPENGBIO反应工作液，置于冰槽里，避免光照。
1． 取出待测的10至15微米厚的冰冻组织切片 
2． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
4． 小心加上200微升 HEPENGBIO反应工作液，铺满整个切片样品表面
5． 放进37℃培养箱里孵育60分钟，避免光照
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO反应工作液
7． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
9． 重复实验步骤6至8二次
10． 小心加上200微升HEPENGBIO固着液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面
11． 室温下孵育15分钟
12． 小心移去切片上的HEPENGBIO固着液（Reagent D）
13． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
14． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
15． 重复实验步骤13至14二次
16． （选择步骤）复染（建议使用HEPENGBIO苏木素复染试剂盒）
17． 放上盖玻片或封片（中性树脂）
18． 即刻在光学显微镜下观察和计数：表达细胞色素氧化酶活性的组织细胞为阳性组织细胞，呈现棕色。